保存方法：2-8℃保存。 有效期：一年。生產(chǎn)日期：見(jiàn)封口。 工作原理： 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。 試劑盒內(nèi)容： | 名稱 | 規(guī)格 | 1 | 5%BSA | 15mL | 2 | 二抗 | 0.5 mL（未稀釋的） | 3 | SABC | 15 mL | 4 | H2O 2 | 10 mL | 5 | DAB顯色液 | 10 mL | 6 | 枸櫞酸鹽緩沖液 | |
操作步驟： 1、防脫片劑處理后的切片在二甲苯中脫蠟，然后系列酒精梯度入水，每次3~5 min。 2、0.01mol/L pH7.4 PBS洗滌3次，每次5 min 。 3、3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 min； 4、0.01mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液(氣管在80~88℃，其他組織92℃)復(fù)性20min，在溶液中冷卻至室溫。0.01 mol/L pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。 5、加入封閉液，于濕盒中感作30min，甩去多余的封閉液。 6、滴加血清到切片上37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃到第二天清晨， 0.01 mol/LpH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。 7、滴加FITC或者HRP酶標(biāo)二抗，覆蓋切片，置濕盒中37℃閉光感作30min左右，取出后洗滌（方法同上）。 8、DAB顯色。 9、蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。 |
